Sangre EDTA.

Conservar las muestras en temperaturas entre 10-25 º C aproximadamente. (Máximo 24h de tomada); para el envió se pueden usar geles refrigerantes o hielo de nevera.Metodología

La muestra debe ser obtenida por punción sanguínea (sangre venosa) con anticoagulante EDTA (Tubo tapa morada), respetando estrictamente la relación sangre-anticoagulante. Se realiza una suspensión celular, sangre total más anticuerpos marcados de forma fluorescente que están dirigidos contra proteínas celulares específicas, dando lugar a un complejo antígeno-anticuerpo marcado con el fluorocromo, generando señales de fluorescencia del complejo antígeno-anticuerpo, que serán detectadas por el citómetro de flujo.Cuando se añade el reactivo a la muestra, los anticuerpos marcados con fluorocromos presentes en el reactivo se unen de forma específica a los antígenos frente a los que están dirigidos, permitiendo la detección por Citometría de Flujo de las distintas subpoblaciones linfocitarias. Luego se procede a realizar una lisis, usando una solución lisante de hematíes.

03 días hábiles.

LEUCOCITOS (Célula/uL) xxx (V.R.: 4500-10500)CONTAJE DE LINFOCITOSLINFOCITOS TOTALES (Celulasxmm3) x (%)LINFOCITOS T CD3 (Celulasxmm3) x (%) (V.R.: 1100-1700)LINFOCITOS T CD4 (Celulasxmm3) x (%) (V.R.: 700-1100)LINFOCITOS T CD8 (Celulasxmm3) x (%) (V.R.: 500-900)INDICE CD4/CD8 x (V.R.: 1.0-1.5)

El recuento de las subpoblaciones linfocitarias generalmente se expresa como número de células marcadas por microlitro µL (recuento absoluto) o como porcentaje de células marcadas respecto al total de linfocitos o leucocitos presentes en la muestra que a su vez puede determinarse por Citometría de Flujo en base a su característico patrón de FSC/SSC (tamaño/granularidad o complejidad interna). El recuento absoluto de cada una de las subpoblaciones linfocitarias (CD3/CD4/CD8), se calcula a partir del Recuento de linfocitos absolutos, obtenidos del hemograma realizado las primeras 6 horas, una vez extraída la muestra.

El inmunofenotipaje linfocitario generalmente es empleado para el monitoreo de subpoblaciones linfocitarias en el síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA), fundamentalmente la cuantificación en sangre periférica de las células CD4+ y los linfocitos CD8+ aporta un valor diagnóstico y pronóstico en esta patología.

Orfao A, Ciudad J, López A, López-Berges MC, Vidriales B, Macedo A, et al. La citometría de flujo enel diagnóstico clínico. Servicio General de Citometría. Universidad de Salamanca, 1993OptiClone Monoclonal Antibodies CD4-FITC / CD8-PE / CD3-PC5. Beckman Coulter. www.beckmancoulter.com