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Conservar las muestras en temperaturas entre 4-8 º C aproximadamente. Las Biopsias fresca se deben conservar a -20º C inmediatamente o a 4º C en buffer lisis suministrado por el laboratorio con geles refrigerantes o hielo de nevera. NO SE ACEPTAN MUESTRAS EN FORMOL.

Extracción de ADN de la muestra mediante estuches comerciales. PCR-RFLP: usando cebadores seleccionas en el fragmento abierto de lectura L1 ORF, descrito por Volker, et al.1996 y Coutlee, et al. 2002, y su visualización en gel de agarosa con coloración por bromuro de etidio.

PCR en tiempo real usando High Risk Human Papilomavirus Fluorescent Polymerase Chain Reaction Diagnostic Kit para la cuantificación construimos una urva patrón partiendo de HR-HVP positive quantitative reference preparation (1.0x106 IU/ml - 1.0x103 IU/ml) suministrado por el kit. La amplificación del ADN es detectada como un incremento de la fluorescencia. Para la realización de la técnica se utiliza un termociclador DA-7600 (DaAn Gene CO.).

10 días hábiles.

ADN DE VIRUS DE PAPILOMA HUMANO VPH DETECTADO, ______Copias/ml LOG:______

ADN DE VIRUS DE PAPILOMA HUMANO VPH DETECTADO, < 500 Copias/ml LOG:---

ADN DE VIRUS DE PAPILOMA HUMANO VPH NO DETECTADO LOG: --

LIMITE DE DETECCIÓN DE LA PRUEBA 500 Copias/ml.

El ensayo ha sido validado por Laboratorio Genomik CA con controles positivos y negativos comerciales; sin embargo, un resultado negativo no excluye la presencia de ADN de VPH por debajo del límite de sensibilidad del ensayo, ni la posible presencia de inhibidores de la reacción de PCR. La confiabilidad del examen está garantizada por la utilización de sofisticados sistemas para la prevención de las contaminaciones, además de la incorporación de un control interno de cada prueba para evitar la aparición de falsos negativos.

La carga viral o persistencia de la infección cervical uterina por VPH es un indicador potencialmente predictivo de enfermedad residual mínima o un indicador de recaídas. Se han hecho estudios sobre este potencial indicador, en la modalidad de tratamiento con RT. Ishikawa et al. determinaron al inicio del tratamiento la presencia o ausencia de VPH por PCR, el cual fue positivo en 50% de las recurrencias locales, 82% en metástasis a distancia y un 75% en metástasis a distancia más recurrencia local.

La detección de VPH puede ser un indicador predictivo de sobrevida general o de la sobrevida de enfermedad local libre.

Coutlee F, Gravitt P, Kornegay J, Hankins C, Richardson H, Lapointe N, Voyer H, Franco, E. Use of PGMY primers in L1 consensus PCR improves detection of human papillomavirus DNA in genital samples. J Clin Microbiol. 2002, Mar; 40(3):902-7.

Ishikawa H, Mitsuhashi N, Sakurai H, Maebayashi K, Nube H. The effects of p53 status and human papillomavirus infection on the clinical outcome of patients with stage IIIB cervical carcinoma treated with radiation therapy alone. Cáncer 2001; 91: 80-9.