Sangre EDTA tubo tapa morada, Suero, Plasma .

Conservar y enviar las muestras en temperaturas entre 4-8 º C aproximadamente; para él envió se pueden usar geles refrigerantes o hielo de nevera.

Extracción de ADN de la muestra mediante estuches comerciales.PCR a tiempo real usando cebadores y Agentes intercalantes de tipo SYBR® Green I No ROX para la cuantificación de ADN de VHB, que fueron diseñados a partir de la secuencia de la región no codificante 5´NCR del virus de la hepatitis C, según Carman, W. et al. 1990. Para la cuantificación construimos una curva patrón partiendo del ADN extraído del suero cuantificado de un paciente VHB positivo (control positivo). La amplificación del ADN fue detectada como un incremento de la fluorescencia. Para la realización de la técnica se utiliza un termociclador Step One de Applied Biosystems.Control positivo: Sueros de pacientes ADN VHB positivos y con carga viral conocida.

07 días hábiles.

Negativo: No se detecta amplificación ADN DE VHB LOG: —Positivo: Se detecta ADN DE VHB X UI/ml LOG: x ADN DE VHB < 100 UI/mlLímite de detección de la prueba: 100 UI/mlSe recomienda que los valores absolutos de carga viral obtenidos mediante procedimientos de amplificación genómica se interpreten como cualquier valor comprendido dentro de un intervalo de 0.5 log (± 300 veces) del valor obtenido.

El ensayo ha sido validado por Laboratorio Genomik C.A. con controles positivos y negativos comerciales; sin embargo, un resultado negativo no excluye la presencia de ADN de VHB debajo del límite de sensibilidad del ensayo, ni la posible presencia de inhibidores de la reacción de PCR. La confiabilidad del examen está garantizada por la utilización de sistemas para la prevención de las contaminaciones, además de la incorporación de un control interno de cada prueba para evitar la aparición de falsos negativos.

Las pruebas de carga viral miden la cantidad de ADN (material genético) del VHB que circula por la sangre. Una carga viral detectable indica que el VHB se está multiplicando activamente. Cuando las enzimas hepáticas tienen un nivel anormal, la mayor carga viral del ADN del VHB parece estar asociada a una mayor gravedad de la enfermedad hepática. Las pruebas de carga viral también resultan útiles para indicar si el tratamiento está siendo eficaz.Las personas infectadas con la hepatitis B deben recibir atención médica con regularidad. Las pruebas bioquímicas del hígado deben repetirse con periodicidad (cada 6-12 meses). Durante el tratamiento, también debe controlarse con frecuencia el nivel de ADN del VHB para determinar cómo está funcionando la terapia. Cuando se tome interferón será preciso vigilar los efectos secundarios, analizando la concentración de glóbulos rojos, haciendo pruebas de la función tiroidea y evaluando la posible presencia de depresión. Los portadores del VHB inactivo deben hacerse pruebas de ALAT con regularidad. Todos los portadores del VHB deben hacerse pruebas para detectar el cáncer de hígado. Es importante encontrar un médico que tenga conocimientos sobre la hepatitis B; los hepatólogos y gastroenterólogos están especializados en las enfermedades del hígado.

Carman, W. et al. Vaccine-induced escape mutant of hepatitis B virus. Med Science, The Lancet 1990; 336: 352-329.